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Collagène humain de Type Ⅱ (COL2) Kit ELISA
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| Model No. : | 10381 |
|---|---|
| Brand Name : | GLOIRE |
Glory Science.
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Description du produit
Collagène humain de Type Ⅱ (COL2) Kit ELISA
POUR LA RECHERCHE UNIQUEMENT. Ne pas utiliser de diagnostic clinique pour
CATALOGUE #: 10381
INTRODUCTION
Pour la détermination quantitative des concentrations humaines de COL2.
Détection d'espèces : humain
Moyen de détection : sérum, plasma, homogénats tissulaires surnageants de culture de cellules.
PRINCIPE DU TEST
Le kit est pour le niveau quantitatif de COL2 dans l'échantillon, adopter purifiée COL2 humaine pour recouvrir la plaque de microtitration, faire des anticorps en phase solide, puis ajouter des échantillons ou des normes dans les puits avec un anticorps spécifique à COL2, puis ajouter HRP étiquetée dans le puits. Après lavage complètement, ajouter la solution de substrat TMB, substrat TMB devient de couleur bleue dans les puits qui contient les anticorps - antigène - anticorps-enzyme complexe, réaction est terminée par l'addition d'une solution de l'arrêt et le changement de couleur est mesuré à une longueur d'onde de 450 nm. La concentration de COL2, dans les échantillons est ensuite déterminée en comparant le diamètre extérieur des échantillons à la courbe standard.
COMPOSITION DU KIT
Quantité de réactif
Microelisa Stripplate 12well × 8strips
Norme : 27 pg/ml 1 × 0. 5ml
Diluant standard de 1 × 1. 5ml
HRP-conjugué réactif 1 × 6 ml
Diluant 1 × 6 ml de l'échantillon
Solution chromogène A 1 × 6 ml
Solution chromogène B 1 × 6 ml
1 × 6 ml de Solution d'arrêt
Pli de la Solution de lavage 1 × 20 ml × 30
1 manuel de l'utilisateur
Bande adhésive 2
Sac scellé 1
CONDITIONS DE STOCKAGE
Le kit non ouvert, est entreposé dans [℃ 2-8].
Pour kit ouvert peut être stocké à [2-8 ℃] pendant environ 1 mois. Si ce n'est pas être utilisé récemment, la norme doit être conservée dans-20 ℃.
MÉTHODE DE LAVAGE
Laver manuellement méthode : secouez là le liquide est resté dans les plaques de l'enzyme ; placer des papiers bibulous sur le banc d'essai et rabat les plaques à la hausse baisse fortement. Injecter au moins 0,35 ml de solution de lavage après dilution dans le puits et laisser mariner 1 ~ 2 minutes. Répétez ce processus selon vos besoins.
Méthode de lavage automatique : s'il y a machine à laver automatique, il ne doit servir dans le test quand vous êtes assez familier avec ses fonctions et de performances.
PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS
1. sérum-coagulation à température ambiante pendant 10-20 min, centrifuger à la vitesse de 2000-3000 tr/min pendant 20 min. Enlever le surnageant, si les précipitations sont apparus, centrifuger à nouveau.
2. plasma-utilisation adaptée plasma EDTA ou citrate comme un anticoagulant, centrifuger à la vitesse de 2000-3000 tr/min pendant 20 min. Enlever le surnageant, si les précipitations sont apparus, centrifuger à nouveau.
3. cellule culture surnageant-détecter les composants sécrétoires, enlever les particules par centrifugation pendant 20 min à la vitesse de 2000-3000 tr/min. Supprimer surnageant détecter la composition des cellules, suspension de cellules diluées avec du PBS (PH7.2-7,4) pour rendre la concentration 1 million de cellules / ml, répétée cycles gel-dégel, endommager les cellules et libérer les composants intracellulaires, centrifugation 20 min à la vitesse de 2000-3000 tr/min. Retirez le surnageant, si la précipitation est apparu, centrifuge à nouveau.
4. échantillons de tissu homogénats-après coupe, vérifier le poids, Pipetter PBS (PH7.2-7,4), gelé à l'azote liquide, maintenir les échantillons à 2-8℃ après la fusion. Pipette de PBS (PH7.4), homogénéisé à la main ou moulins, centrifugation 20 min à la vitesse de 2000-3000 tr/min. Retirez le surnageant.
5. extraire dès que possible après le prélèvement d'échantillons et doivent être testés dès que possible après l'extraction. Si pas, les échantillons peuvent être conservés à -20 ℃.Avoid répété des cycles gel-dégel.
6. ne pas détecter les échantillons qui contiennent NaN3, car NaN3 inhibe l'activité de la HRP.
MODE OPERATOIRE
Étape 1: Norme : ramener tous les réactifs à température ambiante.
Diluer la dilution standard 50μl de norme : Pipette dans chaque tube. Norme de 100 μl pipette (27 pg/ml) dans le premier tube. Et sortir 100 μL du premier tube dans la seconde. Pipeter 50μl du tube du deuxième au troisième tube et produire des séries de dilution comme ci-dessous. Répétez chacune de la concentration pour obtenir la valeur moyenne de chaque puits.
Tube 0 1 2 3 4 5
pg/ml 27 18 12 6 3 1.5
Étape 2: Préparation des échantillons : définir séparément les blancs (puits vide comparaison n'ajoutent échantillon et réactif conjugué-HRP, autre chaque opération de l'étape est la même). Pipetter 40μl dilution échantillon pour essai échantillon bien, puis ajoutez le test échantillon 10μl (dilution finale de l'échantillon est 5 fois), Pipette échantillon aux puits, ne toucher le mur bien autant que possible et mélanger doucement.
Étape 3: Incuber : recouvrir avec la bande adhésive fournie, incuber 30 min à 37℃.
Étape 4: Liquide configurer : diluer solution de lavage 30 fois (ou 20 fois) avec de l'eau distillée.
Étape 5: Lavage : Découvrez la bande adhésive, jeter le liquide, tampon de lavage Pipette dans chaque puits, toujours pendant 30 s puis vidange, répétez 5 fois.
Étape 6: Ajouter enzyme : 50μl réactif conjugué-HRP Pipette dans chaque puits, sauf le puits blanc.
Étape 7: Incuber : opération avec 3.
Étape 8: Lavage : opération avec 5.
Étape 9: Couleur : 50ul Pipette chromogène Solution A et B Solution chromogène dans chaque puits, éviter la lumière préservation pendant 15 min à 37℃
Étape 10 : Arrêter la réaction : Solution d'arrêt Pipette 50μl dans chaque puits, arrêter la réaction (le changement de bleu à jaune).
Étape 11 : Calculer : prendre vierges ainsi que zéro, lire l'absorbance à 450 nm après Pipetteing la Solution d'arrêt dans les 15min.
CALCUL DU RÉSULTAT
Prendre la concentration standard que l'horizontale, la Division d'opposition de valeur pour le tirage vertical, la courbe d'étalonnage sur papier millimétré, Découvrez la concentration correspondante selon l'exemple de valeur de OD par la courbe de l'échantillon, multiplié par la dilution multiples, ou calculer l'équation de régression linéaire de la courbe d'étalonnage la concentration standard et la valeur de OD, avec l'exemple de valeur d'OD dans l'équation, calculer la concentration de l'échantillon, multipliée par le facteur de dilution, le résultat est la concentration réelle de l'échantillon.
Représentation graphique comme suit :
DESCRIPTION
1. la courbe d'étalonnage est dessinée dans des conditions idéales et il est juste pour la référence plutôt que le schéma réel courbe standard du kit.
2. il est recommandé d'établir des données de test appropriée et courbe d'étalonnage selon des conditions de laboratoire respectifs.
PLAGE DE DÉTECTION
Plage de détection du kit est : 0,5 pg/ml-20pg/ml
EXPIRATION
Douze mois [Voir l'étiquette sur la boîte extérieure pour la date précise].
ATTENTION
Le kit sort de la réfrigération doit être équilibré 15-30 minutes à la température de la pièce, si l'enduit ELISA plaques n'ont pas été utilisés vers le haut après l'ouverture, la plaque doit être stockée dans le sac scellé.
Tampon de lavage sera la séparation de la cristallisation, il peut être chauffée à l'eau pour dissoudre.
exemple avec pipettes, déposer chaque étape et relire l'exactitude des informations fréquemment pour éviter l'erreur expérimentale. Échantillon de la pipette dans les 5 min, si le nombre d'échantillon est grand, vous recommandons d'utiliser une pipette multicanaux.
Si la concentration de matière test est trop élevée (l'OD de l'échantillon est supérieure à la première norme bien), s'il vous plaît de diluer l'échantillon (n fois).
Seules limites bande adhésive jetable permet d'éviter la contamination croisée.
Le substrat devrait échapper à la lumière d'être préservés.
Veuillez vous reporter à l'instruction de l'utilisateur strictement, la détermination de résultat du test doit prendre le lecteur de microplaques en tant que norme.
La préparation des échantillons et tous les réactifs doit consulter les processus matériels infectieux.
Ne pas mélanger les réactifs avec ceux d'autres lots.
POUR LA RECHERCHE UNIQUEMENT. Ne pas utiliser de diagnostic clinique pour
CATALOGUE #: 10381
INTRODUCTION
Pour la détermination quantitative des concentrations humaines de COL2.
Détection d'espèces : humain
Moyen de détection : sérum, plasma, homogénats tissulaires surnageants de culture de cellules.
PRINCIPE DU TEST
Le kit est pour le niveau quantitatif de COL2 dans l'échantillon, adopter purifiée COL2 humaine pour recouvrir la plaque de microtitration, faire des anticorps en phase solide, puis ajouter des échantillons ou des normes dans les puits avec un anticorps spécifique à COL2, puis ajouter HRP étiquetée dans le puits. Après lavage complètement, ajouter la solution de substrat TMB, substrat TMB devient de couleur bleue dans les puits qui contient les anticorps - antigène - anticorps-enzyme complexe, réaction est terminée par l'addition d'une solution de l'arrêt et le changement de couleur est mesuré à une longueur d'onde de 450 nm. La concentration de COL2, dans les échantillons est ensuite déterminée en comparant le diamètre extérieur des échantillons à la courbe standard.
COMPOSITION DU KIT
Quantité de réactif
Microelisa Stripplate 12well × 8strips
Norme : 27 pg/ml 1 × 0. 5ml
Diluant standard de 1 × 1. 5ml
HRP-conjugué réactif 1 × 6 ml
Diluant 1 × 6 ml de l'échantillon
Solution chromogène A 1 × 6 ml
Solution chromogène B 1 × 6 ml
1 × 6 ml de Solution d'arrêt
Pli de la Solution de lavage 1 × 20 ml × 30
1 manuel de l'utilisateur
Bande adhésive 2
Sac scellé 1
CONDITIONS DE STOCKAGE
Le kit non ouvert, est entreposé dans [℃ 2-8].
Pour kit ouvert peut être stocké à [2-8 ℃] pendant environ 1 mois. Si ce n'est pas être utilisé récemment, la norme doit être conservée dans-20 ℃.
MÉTHODE DE LAVAGE
Laver manuellement méthode : secouez là le liquide est resté dans les plaques de l'enzyme ; placer des papiers bibulous sur le banc d'essai et rabat les plaques à la hausse baisse fortement. Injecter au moins 0,35 ml de solution de lavage après dilution dans le puits et laisser mariner 1 ~ 2 minutes. Répétez ce processus selon vos besoins.
Méthode de lavage automatique : s'il y a machine à laver automatique, il ne doit servir dans le test quand vous êtes assez familier avec ses fonctions et de performances.
PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS
1. sérum-coagulation à température ambiante pendant 10-20 min, centrifuger à la vitesse de 2000-3000 tr/min pendant 20 min. Enlever le surnageant, si les précipitations sont apparus, centrifuger à nouveau.
2. plasma-utilisation adaptée plasma EDTA ou citrate comme un anticoagulant, centrifuger à la vitesse de 2000-3000 tr/min pendant 20 min. Enlever le surnageant, si les précipitations sont apparus, centrifuger à nouveau.
3. cellule culture surnageant-détecter les composants sécrétoires, enlever les particules par centrifugation pendant 20 min à la vitesse de 2000-3000 tr/min. Supprimer surnageant détecter la composition des cellules, suspension de cellules diluées avec du PBS (PH7.2-7,4) pour rendre la concentration 1 million de cellules / ml, répétée cycles gel-dégel, endommager les cellules et libérer les composants intracellulaires, centrifugation 20 min à la vitesse de 2000-3000 tr/min. Retirez le surnageant, si la précipitation est apparu, centrifuge à nouveau.
4. échantillons de tissu homogénats-après coupe, vérifier le poids, Pipetter PBS (PH7.2-7,4), gelé à l'azote liquide, maintenir les échantillons à 2-8℃ après la fusion. Pipette de PBS (PH7.4), homogénéisé à la main ou moulins, centrifugation 20 min à la vitesse de 2000-3000 tr/min. Retirez le surnageant.
5. extraire dès que possible après le prélèvement d'échantillons et doivent être testés dès que possible après l'extraction. Si pas, les échantillons peuvent être conservés à -20 ℃.Avoid répété des cycles gel-dégel.
6. ne pas détecter les échantillons qui contiennent NaN3, car NaN3 inhibe l'activité de la HRP.
MODE OPERATOIRE
Étape 1: Norme : ramener tous les réactifs à température ambiante.
Diluer la dilution standard 50μl de norme : Pipette dans chaque tube. Norme de 100 μl pipette (27 pg/ml) dans le premier tube. Et sortir 100 μL du premier tube dans la seconde. Pipeter 50μl du tube du deuxième au troisième tube et produire des séries de dilution comme ci-dessous. Répétez chacune de la concentration pour obtenir la valeur moyenne de chaque puits.
Tube 0 1 2 3 4 5
pg/ml 27 18 12 6 3 1.5
Étape 2: Préparation des échantillons : définir séparément les blancs (puits vide comparaison n'ajoutent échantillon et réactif conjugué-HRP, autre chaque opération de l'étape est la même). Pipetter 40μl dilution échantillon pour essai échantillon bien, puis ajoutez le test échantillon 10μl (dilution finale de l'échantillon est 5 fois), Pipette échantillon aux puits, ne toucher le mur bien autant que possible et mélanger doucement.
Étape 3: Incuber : recouvrir avec la bande adhésive fournie, incuber 30 min à 37℃.
Étape 4: Liquide configurer : diluer solution de lavage 30 fois (ou 20 fois) avec de l'eau distillée.
Étape 5: Lavage : Découvrez la bande adhésive, jeter le liquide, tampon de lavage Pipette dans chaque puits, toujours pendant 30 s puis vidange, répétez 5 fois.
Étape 6: Ajouter enzyme : 50μl réactif conjugué-HRP Pipette dans chaque puits, sauf le puits blanc.
Étape 7: Incuber : opération avec 3.
Étape 8: Lavage : opération avec 5.
Étape 9: Couleur : 50ul Pipette chromogène Solution A et B Solution chromogène dans chaque puits, éviter la lumière préservation pendant 15 min à 37℃
Étape 10 : Arrêter la réaction : Solution d'arrêt Pipette 50μl dans chaque puits, arrêter la réaction (le changement de bleu à jaune).
Étape 11 : Calculer : prendre vierges ainsi que zéro, lire l'absorbance à 450 nm après Pipetteing la Solution d'arrêt dans les 15min.
CALCUL DU RÉSULTAT
Prendre la concentration standard que l'horizontale, la Division d'opposition de valeur pour le tirage vertical, la courbe d'étalonnage sur papier millimétré, Découvrez la concentration correspondante selon l'exemple de valeur de OD par la courbe de l'échantillon, multiplié par la dilution multiples, ou calculer l'équation de régression linéaire de la courbe d'étalonnage la concentration standard et la valeur de OD, avec l'exemple de valeur d'OD dans l'équation, calculer la concentration de l'échantillon, multipliée par le facteur de dilution, le résultat est la concentration réelle de l'échantillon.
Représentation graphique comme suit :
DESCRIPTION
1. la courbe d'étalonnage est dessinée dans des conditions idéales et il est juste pour la référence plutôt que le schéma réel courbe standard du kit.
2. il est recommandé d'établir des données de test appropriée et courbe d'étalonnage selon des conditions de laboratoire respectifs.
PLAGE DE DÉTECTION
Plage de détection du kit est : 0,5 pg/ml-20pg/ml
EXPIRATION
Douze mois [Voir l'étiquette sur la boîte extérieure pour la date précise].
ATTENTION
Le kit sort de la réfrigération doit être équilibré 15-30 minutes à la température de la pièce, si l'enduit ELISA plaques n'ont pas été utilisés vers le haut après l'ouverture, la plaque doit être stockée dans le sac scellé.
Tampon de lavage sera la séparation de la cristallisation, il peut être chauffée à l'eau pour dissoudre.
exemple avec pipettes, déposer chaque étape et relire l'exactitude des informations fréquemment pour éviter l'erreur expérimentale. Échantillon de la pipette dans les 5 min, si le nombre d'échantillon est grand, vous recommandons d'utiliser une pipette multicanaux.
Si la concentration de matière test est trop élevée (l'OD de l'échantillon est supérieure à la première norme bien), s'il vous plaît de diluer l'échantillon (n fois).
Seules limites bande adhésive jetable permet d'éviter la contamination croisée.
Le substrat devrait échapper à la lumière d'être préservés.
Veuillez vous reporter à l'instruction de l'utilisateur strictement, la détermination de résultat du test doit prendre le lecteur de microplaques en tant que norme.
La préparation des échantillons et tous les réactifs doit consulter les processus matériels infectieux.
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